产品简介

膨胀显微成像技术（expansion microscopy，ExM）是一种新型超高分辨成像技术。该技术借助可膨胀水凝胶均匀地放大生物样本，在常规光学宽场条件下轻松实现高分辨成像，在普通共聚焦条件下实现超高分辨成像。蛋白质、核酸、脂质等生物大分子均可借助 ExM 进行超高分辨成像。本产品经过系统优化和验证，适用于细胞爬片免疫荧光实验，可将样本在三维方向均匀的放大 4.5 倍左右，相应的空间分辨率也能提高 4.5 倍左右。由于空间的均匀拉伸，膨胀后，生物分子的空间分布关系不受影响。

产品内容

自备材料

• 细胞爬片、倒置荧光显微镜。

使用说明

• 按免疫荧光实验流程操作，获得经荧光染色的细胞爬片，并确保可以观察到荧光信号后，利用本试剂盒完成下述过程。
  特别注意：
  ①需将原荧光抗体浓度提高5~10倍使用，原因详见注意事项4；
  ②以下操作步骤以9mm细胞爬片为例，如使用其它规格细胞爬片，可根据情况调整各试剂用量，并使用合适的制胶模具。
  1. 配胶：将试剂 A、试剂 B 和试剂 C 按照下表比例混合配制成胶溶液，以9mm细胞爬片为例，推荐使用φ10mm孔板制胶模具，一般使用100μL胶溶液即可完全覆盖细胞样本；
  

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• 注意：若使用 14 mm 爬片，需要用到φ15 mm 孔板制胶模具时，一般配制 240 μL 胶溶液即可完全覆盖细胞样本。

• 2. 灌胶：准备两张封板膜，将其中一张封板膜（撕去保护膜）贴在φ10 mm 孔板制胶模具底部，把细胞爬片（有细胞的一面朝上）放入胶孔内，灌入步骤 1 中混合均匀的胶溶液，并覆盖上另一张封板膜（撕去保护膜），使胶孔形成封闭空间，此过程需避免产生气泡，最后将灌完胶的模具室温避光孵育 45 min，确保胶完全凝固；
  3. 拆胶：小心地移除封板膜，将凝胶从制胶模具中取出，可以看到细胞已附着在凝胶的表面；
      注意：凝胶会有些干粘，可以加少量纯净水润湿，以便顺利取下。
  4. 膨胀：将凝胶样本置于约 100 mL 纯净水中（需确保容器洁净且宽敞），避光室温膨胀 2 h 后或者 4℃过夜膨胀，倒出多余水分，小心取出凝胶样本，裁成合适的尺寸，请将凝胶有细胞的一面朝下 ( 有爬片凹痕的那一面 )，置于玻底培养皿中或载玻片上，添加少量纯净水，使样本保持湿润且不会在水中飘动。膨胀后的凝胶不需要封片，直接选择合适的倒置荧光显微镜观察或拍照。
      注意：①根据物镜镜头使用相匹配的耗材进行成像，比如在油镜下观察或拍照需使用玻底皿，空气镜需使用载玻片；
                 ②DAPI 在凝胶膨胀过程中会与核酸脱离，因此如需染核，需在膨胀后将凝胶置于纯净水配制的 DAPI 染液中复染 5 min，用纯净水洗去染液，进行显微镜观察或拍照。切勿使用 PBS 配制 DAPI 染液，否则会缩胶；
                 ②若使用的拍摄工具不能层扫，采集图像时会遇到同一视野下不同区域清晰度不一的情况，模糊的区域是未对焦造成的。样本经 3D 均匀拉伸后，厚度变大，需要在不同焦距下拍摄多张图片 ( 相当于手动层扫 )，再对这些图片进行投影融合处理即可，或使用景深扩展功能进行拍摄。