产品简介

本产品可配制50块Tricine-PAGE胶(8×10cm，厚度为1mm)，适用于2~20kDa蛋白的Tricine体系电泳。

本本试剂盒提供的 改良型促凝剂 具有更好的稳定性和催化效能，为方便操作，已开盖的 改良型促凝剂 可置于 4℃保存至少三个月。

操作步骤

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  制胶(以配制一块0.75/1.0mm厚度的8×10cm凝胶为例)
  1. 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.0/2.7mL，混匀；
  2. 向步骤1的混合溶液中加入40/60μL的改良型促凝剂，混匀；
  3. 将步骤2的混合溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可(注意：此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于配胶杯中，以判断胶凝固状况)，加入适量水或醇(如异丙醇、正丁醇等)覆盖于下层胶之上；
  4. 待下层胶凝固后(约15min)，倒去上层水或醇；
        注：当水(醇)和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固。
  5. 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.5/0.75mL，混匀；
        注：由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀。
  6. 向步骤5的混合溶液中加入10/15μL的改良型促凝剂，混匀；
  7. 将步骤6的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿；
  8. 待上层胶凝固后(约15min)，拔去梳齿即可用于电泳。
  

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  电泳
  1. 将适量Tris/Tricine/SDS电泳缓冲液(10×)(货号：PS122)稀释成1×Tris/Tricine/SDS电泳缓冲液；
  2. 将样品与Tricine蛋白上样缓冲液(变性，还原型，2×)(货号：LT104)等体积混匀，95℃加热5~10min，加热结束后，高速离心5min，上清即可用于电泳分析；
        注：蛋白Marker需根据相应说明书进行操作。
  3. 向电泳槽的内槽注满1×Tris/Tricine/SDS电泳缓冲液，外槽注入适量1×Tris/Tricine/SDS电泳缓冲液，轻轻拔出梳齿，用移液器将梳孔吹洗干净，将处理后的蛋白样品或Marker加入点样孔，按以下推荐条件进行恒压电泳即可。
        10% Tricine胶，120V，1h；
        16% Tricine胶，120V，2h。
        注意：电泳结束后，应尽快进行后续步骤，防止多肽扩散出凝胶外。

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  染胶
  1. 因多肽在凝胶中易发生扩散，建议将电泳后的Tricine胶在异丙醇固定液(50%异丙醇，10%乙酸，40%纯水)中固定30min后，再进行染色；
  2. 弃去异丙醇固定液，加入适量考马斯亮蓝快速染液(免脱色)(货号：PS111)，以覆盖凝胶为宜，室温下于水平摇床上染色10~15min。如蛋白量较低，可适当延长染色时间，实际染色时间可根据条带显现程度决定。染色结束后，弃去染色液，加入纯水洗涤去除残留染液，即可观察结果。

凝胶浓度选择参考