本产品可应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。
通常正常细胞的G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),G2/M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于2N和4N之间,利用碘化丙啶(PI)可与细胞DNA结合的特性,通过流式细胞术对细胞内DNA含量进行检测,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡分析,计算出处于细胞周期不同时期的细胞所占的百分比。
1.实验准备:用ddH2O配置70%乙醇,置于-20℃过夜预冷;
2.样本处理:
(1)按实验方案对细胞进行处理后,收集约5×105个细胞;
(2)300×g 离心5min,弃上清;
(3)加入1mL PBS(货号:CB012)洗涤,300×g离心5min,弃上清。
3.固定:向细胞中加入1mL预冷的70%乙醇,重悬细胞并混匀,置于-20℃固定1h或过夜;
4.300×g离心5min,弃上清,加入1mL PBS重悬细胞,室温放置15min;
5.300×g离心5min,弃上清,加入100μL RNase A并充分重悬细胞,37°C孵育15min;
6.加入400μL PI染色液并充分混匀,2~8°C避光孵育10min;
7.300×g离心5min,弃上清,加入1mL PBS重悬细胞,立即进行流式细胞术检测,记录激发波长488nm处红色荧光。
1. 请勿使用PBS配制70%乙醇,否则会导致蛋白质在固定过程中发生沉淀;
2. PI染色液易发生荧光淬灭,实验操作和保存时请注意尽量避光;
3. PI染色液对人体有害,请避免直接接触或吸入体内;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴口罩和一次性手套操作;
5. 本产品仅限科研使用。