产品概述

在染色体核型分析和细胞周期研究中，需要制备细胞周期一致的细胞样本，以便于观察和统计。本试剂盒可使细胞同步化，令细胞样本处于细胞周期的同一阶段，极大地提高研究目标的样本量。

在本试剂盒中，试剂A能阻止细胞分裂过程中纺锤体的形成，使细胞有丝分裂停滞在分裂中期，在这个阶段，染色体形态清晰且收缩程度适中，便于染色观察，有助于提高实验的成功率和准确性。

产品内容

自备试剂

甲醇，冰乙酸。

操作步骤

1. 处理细胞：细胞传代培养至对数生长期后(活细胞总数约为1~5×10⁶个)，将试剂A加入至细胞培养基中，使试剂A最终浓度为1×(即试剂A被稀释100倍)，继续培养2~16h(常用细胞系一般过夜最佳)；
           注意：确保细胞培养条件适宜，细胞生长状态良好，培养至对数增殖期以获得足够数量和质量的分裂中期细胞。

2. 收集细胞至15mL离心管中，1,500×g室温离心1min，吸弃上清；

3. 低渗作用：向细胞沉淀中缓慢滴加入500μL试剂B(37℃预热效果更佳)，混匀后，补加试剂B至5mL，37℃静置15min，再转至室温静置15min；

4. 1,500×g室温离心1min，吸弃上清；

5. 固定：将甲醇与冰乙酸按3:1(V/V)混匀配置成固定液，并在上一步得到的细胞沉淀中加入1mL新鲜配制的固定液，混匀后，补加固定液至8mL，室温静置25min；
           注意：固定液需现用现配，固定操作要规范，以确保染色体形态固定良好且不被破坏。

6. 1,500×g 室温离心 1 min，吸弃上清，用 500 μL 新鲜配制的固定液重悬细胞沉淀；

7. 制片：将细胞悬液滴加在载玻片上，空气中干燥约5min；
           注意：①涂片或滴片时要均匀，避免染色体重叠或丢失；
                      ②提前将载玻片于-20℃预冷，增加细胞悬液滴落高度，使其充分铺开，会使实验结果更理想。

8. (选做)胰酶处理：使用0.25%胰酶溶液(货号：CB011)处理载玻片上的样本10sec左右；
           注意：①只做染色体数量分析时可跳过此步骤；
                      ②严格控制胰酶浓度、处理温度和时间，防止细胞被过度消化或消化不足。

9. 染色：将试剂C滴加于载玻片上，充分覆盖，室温染色5min；
           注意：染色时间可根据预实验情况进行调整，保证染色效果均匀且不过深或过浅。

10. 观察：用灭菌水清洗载玻片3~5次，在吸水纸上沥干水分，空气中干燥后，在倒置显微镜下观察结果。
           注意：若需要进一步脱色，可稍微沥水后放入20%乙醇中快速涮洗2次，再用纯水洗2次。

结果图