产品概述

本产品是一种预混合的细胞刺激剂，专为细胞因子检测而设计，包含了优化浓度后的佛波酯(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate,PMA)、钙离子霉素(Ionomycin)以及蛋白转运抑制剂布雷非德菌素A(Brefeldin A，BFA)。

PMA是一种强效的蛋白激酶C(PKC)激活剂。它通过模仿二酰甘油(DAG)的作用，激活PKC，从而引发细胞内一系列信号传导事件。Ionomycin是一种钙离子载体，能够增加细胞内的钙离子浓度。它通过在细胞膜上形成通道，使钙离子从细胞外或细胞内储存库流入细胞质。PMA和Ionomycin联合使用，可以强效激活T细胞，其能够模拟T细胞受体(TCR)激活的多个信号途径，有效活化细胞，从而诱导产生细胞因子。BFA通过抑制细胞内蛋白质的转运，防止它们被分泌出细胞。通过免疫荧光染色技术，可以在细胞内部检测到这些被捕获的细胞因子和蛋白质，从而为研究人员提供了可靠的手段来研究细胞的分泌功能和相关的生物学过程。

操作步骤

1. 将细胞重悬于所需的细胞培养基中。推荐的细胞悬液浓度为 1~2×10⁶cells/mL；

2. 每毫升细胞悬液中加入2μL细胞刺激剂溶液；

3. 将上述细胞放入37°C、5% CO₂细胞培养箱中孵育4~6h；

4. 收集活化的细胞，350×g离心5min，弃上清液；

5. 向细胞沉淀中加入5mL的PBS(货号：CB012)，充分混匀后350×g离心5min，弃上清液；

6. 重复步骤5；

7. 完成实验后，可以用于检测表面标志物或目的蛋白。