产品概述

本产品适用于Tris-甘氨酸电泳体系，所制备的凝胶为免染PAGE胶，蛋白条带紫外曝光即可成像，无需染胶。

试剂盒采用上层胶和下层胶的预混配方，只需加入改良型促凝剂即可凝胶，简便快捷。所配的上层胶带有颜色(红色、蓝色或绿色)，点样孔清晰易辨，方便点样。三种颜色设计，可用于区分含不同样品的凝胶。本试剂盒灌制的凝胶也可用于非变性PAGE凝胶电泳。

本产品配套提供改良型促凝剂，其具有更好的稳定性和催化效能，配胶过程中无需额外添加TEMED。为方便操作，已开盖使用中的改良型促凝剂可置于4℃保存至少三个月。

制胶流程(以一块0.75/1.0/1.5mm的mini胶为例)

• 步骤1:

  取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.0/2.7/4.0mL，混匀；

• 步骤2:

  向步骤1的混合溶液中加入40/60/80μL的改良型促凝剂，混匀；
  注意：加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合。

• 步骤3:

  将步骤2的混合溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可(注意：此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于配胶杯中，以判断胶凝固状况)，加入适量水或醇(如异丙醇、正丁醇等)覆盖于下层胶之上；

• 步骤4:

  待下层胶凝固后(约15min)，倒去上层水或醇；
  注意：当水(醇)和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝固。

• 步骤5:

  取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.5/0.75/1.0mL，混匀；
  注意：由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀。

• 步骤6:

  向步骤5的混合溶液中加入10/15/20μL的改良型促凝剂 ，混匀；
  注意：加入改良型促凝剂后，需轻柔混匀，防止过多氧气混入胶溶液，抑制凝胶聚合。

• 步骤7:

  将步骤6的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿；

• 步骤8:

  待上层胶凝固后(约15min)，拔去梳齿即可用于电泳。
  推荐电泳条件为：150V，约50min(或200V，约35min)。
  注意：请尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液。

• 步骤9:

  电泳结束后，即可将凝胶从玻璃板中取出，放入成像仪紫外曝光成像，或在紫外切胶台上直接观察。
  注意：①紫外激发荧光基团需一定时间，一般经1~5min，凝胶上即可呈现清晰的蛋白条带；
             ②观察Western Blot转印后膜上蛋白条带，必须在电泳后，将凝胶经紫外激发出现清晰条带后，再进行转膜操作。若直接转膜再用紫外激发，荧光信号会很弱或无信号。

凝胶浓度选择参考