PreScission蛋白酶是由人鼻病毒3C蛋白酶(Human Rhinovirus 3C Protease, HRV 3C)和谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-Transferase,GST)融合形成的重组蛋白。PreScission蛋白酶能特异识别Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro(LEVLFQ↓GP)短肽，并在谷氨酰胺(Gln,Q)和甘氨酸(Gly,G)之间发生切割，常用于切除融合蛋白标签，如pGEX-6P系列载体自带该酶切位点，目标蛋白与该序列融合表达，经GST标签纯化后，可用PreScission蛋白酶进行酶切去除GST标签。本产品也融合了GST标签，可通过GST亲和层析柱去除。
注：
①一个PreScission蛋白酶单位(U)定义为在4℃下，16h内将100μg GST标签融合蛋白的90%完全切割所需的酶量；
②本产品提供的PreScission蛋白酶缓冲液量如不足以用于实验，则需额外配制，10×PreScission蛋白酶切缓冲液的组分为500mM Tris-HCl，1.5M NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，pH7.5。
因为不同标签蛋白所具有的特性不同，需要对反应条件进行优化，具体操作如下：
1. 按下表依次加入相应样品和试剂，配制好酶切体系；
2. 混匀后，推荐4℃反应16h或过夜完成融合蛋白切割反应；
3. 取20μL酶切产物进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中，如有必要，也可以在反应的不同时间点取少量酶切产物，后续通过电泳分析来确定最优的反应时长。
注：对于绝大多数GST标签融合蛋白，按以下条件即可完成酶切：
● 酶量：1:25~1:100(酶U:融合蛋白μg)；
● 反应温度：4℃；
● 反应时间：16h或过夜；
1. 将GST标签融合蛋白结合于纯化柱并充分洗涤后，用10倍柱体积的1×PreScission蛋白酶切缓冲液平衡纯化柱；
2. 每100μg GST标签融合蛋白需使用约2U PreScission蛋白酶(或按前述步骤优化后的条件)。对于10mg GST标签融合蛋白，需使用200U PreScission蛋白酶，用1×PreScission蛋白酶切缓冲液稀释至与凝胶柱相同的体积，即1mL；
3.▲将稀释好的1mL PreScission蛋白酶泵入纯化柱中，4℃酶切4~8h或过夜。
▲如果蛋白结合是在离心管中进行的，可将稀释后的PreScission蛋白酶直接加入离心管中，4℃在摇床上缓慢摇动4~8h或过夜进行酶切；
4.▲用1倍柱体积的1×PreScission蛋白酶切缓冲液平衡纯化柱，重复三次，分别收集每次的洗脱液。
▲如果酶切反应是在离心管中进行的，先1000×g离心2min，收集上清，然后加入1mL 1×PreScission蛋白酶切缓冲液重悬沉淀，1000×g离心2min，收集上清，接着再加入1mL 1×PreScission蛋白酶切缓冲液重悬沉淀，1000×g离心2min，收集上清。
上述步骤收集的洗脱液或上清液中含有已切除GST标签的目的蛋白，而GST标签和带有GST标签的PreScission蛋白酶则仍然结合在凝胶上。
因为不同标签蛋白所具有的特性不同，需要对反应条件进行优化，具体操作如下：
1. 使用脱盐柱快速除去洗脱组分中的GSH、咪唑等物质，或用1×PreScission蛋白酶切缓冲液进行透析；
2. 按每100μg标签融合蛋白加入2U PreScission蛋白酶的比例加入蛋白酶(如果蛋白未定量，可以按照每1mL凝胶加入200U PreScission蛋白酶)，4℃酶切4~8h或过夜；
3. 将酶切后的蛋白样品加入预先用1×PreScission蛋白酶切缓冲液平衡好的GST标签蛋白纯化琼脂糖凝胶(货号：YJ105)，室温结合20~30min；
4. 500×g离心5min，收集上清，其中含有已切除标签的目的蛋白，PreScission蛋白酶则结合在凝胶沉淀中。
如果目的蛋白是GST标签融合蛋白，那么残留的未被酶切的GST标签融合蛋白、PreScission蛋白酶和酶切下来的GST标签都会结合在凝胶沉淀中，而已切除GST标签的目的蛋白则在上清液中。
1. 100mM ZnCl2、4mM AEBSF和100μM Chymostatin会抑制PreScission蛋白酶活性50%以上；
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
3. 本产品仅限科研使用。
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