SUMO蛋白酶也被称为Ulp,作为一种高活性半胱氨酸蛋白酶,其是酿酒酵母中ULP1(Ubl特异性蛋白酶1)的重组片段。SUMO蛋白酶可以高度特异性地将重组融合蛋白中的SUMO切除,其识别对象是泛素样蛋白SUMO的三级结构,而不是氨基酸序列。SUMO蛋白酶的最佳催化温度为30℃,但其在很宽的温度(4℃~30℃)和pH(pH7.0~9.0)范围内都具有活性。此外,SUMO蛋白酶带有His标签,在融合蛋白切割后,可利用亲和层析轻松将其去除。
注:一个SUMO蛋白酶单位(U)定义为在30℃下,1h内将2μg底物蛋白的85%完全切割所需的酶量。
按下表依次加入相应样品和试剂,配制好酶切体系;
混匀后,推荐4℃过夜完成融合蛋白切割反应。用户也可以根据所研究的目的蛋白摸索反应条件,比如,置于30℃反应,分别在 1h、2h、4h及6h后各取10μL反应液,用于检测切割效率。此外,也可以设置温度梯度来优化反应条件;
反应完成后,可取少量酶切产物进行SDS-PAGE分析,酶切后体系中的SUMO蛋白酶可通过His标签纯化树脂亲和层析去除。
1. 为达到最好的酶切效果,请保证样本为部分或完全纯化的蛋白;
2. 反应体系中咪唑的浓度应低于150mM,否则SUMO蛋白酶的活性会受到抑制;
3. SUMO蛋白酶最理想的反应液中NaCl的浓度为150mM。不过根据实际情况,可在100mM~300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
5. 本产品仅限科研使用。