产品参数

自备试剂

操作步骤

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  样本处理
      1. 准备哺乳动物细胞(1.0×10⁴~1.0×10⁵个)，离心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸弃上清
      2. 加入90μL结合缓冲液 ，充分混匀重悬细胞，离心收集(4℃，600×g，3~5min)，小心吸弃上清；
      3. 加入90μL洗脱缓冲液 ，同时加入蛋白酶抑制剂(货号：GRF101)，充分混匀重悬细胞；
  

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  磁珠预处理
      4. 用移液器轻柔吹打伴刀豆球蛋白A磁珠，使其充分混悬，取10μL磁珠悬液置于新的1.5mL离心管中，接着在磁力架上静置1min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清
      5. 加入200μL结合缓冲液 ，用移液器轻柔吹打重悬磁珠，接着在磁力架上静置1min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清；
      6. 重复步骤 5 一次；
      注意：面对多个样品时，可先将总共所需的磁珠预处理后再分装到各个反应管中。
  

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  样品的结合
      7. 在预处理后的磁珠中加入步骤3处理后的细胞样本，置于翻转混合仪上孵育(常温30min)，接着在磁力架上静置1min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，小心吸弃上清，离心管中剩余的即为蛋白-磁珠复合物；
  

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  洗涤
      8. 在步骤7得到的蛋白-磁珠复合物中加入500μL漂洗缓冲液，用移液器轻柔吹打磁珠，使其充分混悬，接着在磁力架上静置1min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，吸弃上清。再重复此步骤两次。
  

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  蛋白洗脱
      9. 在步骤8得到的蛋白-磁珠复合物中加入50~250μL洗脱缓冲液，置于翻转混合仪上孵育(常温10~30min)，接着在磁力架上静置1min，待磁珠吸附到离心管侧壁上后，收集上清，即为目的蛋白。