产品概述

本产品是一款高效、便捷、稳定，并可去除基因组DNA污染的cDNA第一链合成预混试剂，其核心成分——经分子改造的第三代M-MLV逆转录酶，连同反应缓冲液、RNA酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN引物和随机引物等反应所需组分全部汇于一管，仅需加入RNA模板和水即可进行反应。使用本产品获得的cDNA,下游可用于qPCR、普通PCR等实验。

此外，本产品配备的dsDNase可以高效去除基因组DNA污染，相较于常规的DNase l,dsDNase能够特异性的消化双链DNA(包括DNA与RNA的杂合链),并且具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活，从而无需额外加入EDTA进行失活，不仅节省实验时间，而且避免了EDTA对逆转录反应的抑制作用。

操作步骤

• 针对基因组DNA含量较低的RNA样品(推荐方案)
• 1. 在冰上配置以下反应体系：

• 
  

• 2. 轻柔吸打混匀，瞬时离心；
• 3. 37℃孵育2min，去除基因组DNA污染；
• 4. 55℃孵育15min；
• 5. 85℃孵育5min，将反应产物迅速置于冰上，所得的cDNA可用于后续试验；或保存于﹣20℃。
      注意：cDNA溶液保存于﹣20℃，建议不超过1周；﹣80℃可长期保存。
• 针对基因组DNA含量较高的RNA样品
• 一、去除基因组DNA污染
• 1. 在冰上配置以下反应体系：

• 
  

• 2. 轻柔吸打混匀，瞬时离心；
• 3. 37℃孵育2min，去除基因组DNA污染；
      注意：若RNA中基因组DNA污染严重，可37℃孵育5min。
• 4. 65℃孵育2min，并将反应液置于冰上。
• 二、合成第一链cDNA
• 5. 在冰上配置以下反应体系：

• 
  

• 6. 轻柔吸打混匀，瞬时离心；
• 7. 50℃温育15min；
      注意：若目标RNA不含Poly(A)结构，建议在本步骤前预先25℃温育10min。
• 8. 85℃孵育5min，将反应产物迅速置于冰上，所得的cDNA可用于后续试验；或保存于﹣20℃。
      注意：cDNA溶液保存于﹣20℃，建议不超过1周；﹣80℃可长期保存。