Super-PAGETM预制胶(Bis-Tris)是一款安全、快捷、高性能的预制聚丙烯酰胺凝胶,可用于蛋白分离。本预制胶加样孔数分为12孔/15孔,推荐最大上样量为35μL/25μL,详细尺寸如下:
胶板:长×宽×高为100×80×4.7mm;
凝胶:长×宽×高为80×70×1mm。
此外,随胶配套的Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液为中性,可大幅提高凝胶的稳定性,并可有效避免蛋白在电泳过程中发生再修饰。
分辨率高
全新凝胶缓冲体系配方使蛋白电泳条带更清晰锐利,分辨率更高性能优越
针对性的设计有效降低边缘效应,轻松获得理想的电泳结果稳定性高
采用自动化灌胶生产技术,确保了产品质量的高稳定性和重复性操作简便
即开即用,无需额外配制各种缓冲液和灌胶操作,并配有Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液兼容性强
兼容市场上主流的mini电泳槽,如雅酶、Bio-Rad、天能和君意东方等安全性高
无需接触有毒试剂*配置方法
1. 将大约300 mL蒸馏水倒入烧杯,并向其中缓慢加入1袋Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液速溶颗粒,搅拌溶液直至颗粒完全溶解;
2. 向步骤1所得溶液中加入蒸馏水,定容至500 mL,即为1×Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液。
从包装袋中取出预制胶,如下图所示,将胶板底部的粉色胶带撕去;
将梳子按箭头方向从胶板中平稳地平行推出;
装胶前准备工作,以 Bio-Rad 或雅酶等品牌电泳设备为例,请按如下步骤操作:
这类电泳槽的U型密封条顶部有突起结构,而雅酶Super-PAGETM系列预制胶该部位是平的,因此电泳前需将具有突起结构的密封条取出后反向安装,使平滑面朝外,从而防止漏液(如下图所示)。具体操作如下:
a.将电泳槽中的U型密封条(如图红色部分)拉出,注意这时的密封条两端是有突起的,突起的一面为正面,无突起的为反面;
b.将密封条旋转180°(正面朝里,反面朝外),重新装回电泳装置中,注意把密封条周边压实,防止发生漏液;
按下图所示方法将预制胶安装到电泳装置中;
向电泳槽的内槽中加入足量的1×Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液,浸没点样孔并使液面停留在其上方5mm处,接着在外槽中也加入足量的1×Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液,以确保电泳过程中适当的冷却效果;
注意:
①确保外槽电泳缓冲液面低于内槽液面,不可漫过胶板;
②Tris-Glycine电泳缓冲液与本产品的Bis-Tris缓冲体系不兼容,请勿使用。
使用注射器或其它工具吸取适量1×Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液 ,将点样孔轻轻冲洗干净,去除气泡和残留的储存缓冲液。将上样缓冲液处理后的蛋白样品加入点样孔,启动电泳,推荐电压为140~150V,最高不超过180V;
电泳结束后,从胶板中取出凝胶,即可进行染胶或转膜等操作。取胶具体操作步骤如下:
⑴待电泳结束后,将胶板从电泳槽中取出;
⑵用撬具小心插入胶板之间的空隙,按下图所示慢慢撬动胶板上、中、下三个位置,直至胶板两侧完全分开;
⑶胶板撬开之后,凝胶可能还会粘在其中一块胶板上,只需将胶板附着凝胶的一侧浸入水中,贴着水面将其倾斜轻轻提起,凝胶即可脱离,将凝胶从水中取出进行后续实验。
分离图谱(Tris/MOPS/SDS电泳缓冲液,雅酶蛋白分子量标准WJ103,蛋白条带分子量单位:kDa)
1.
蛋白电泳示踪染料溴酚蓝扭曲、电泳时间大幅度延长:
●可能是内槽电泳缓冲液泄漏导致。建议重新夹胶板,防止在电泳过程中内槽液面逐步降低;
2.
电泳时泳道拖尾严重,点样孔样品滞留明显:
●可能原因是样品处理不充分:
a.裂解处理不够充分。建议降低裂解前的样品浓度,或增加裂解液的比例,使样品充分裂解;
b.上样缓冲液处理不充分。建议对裂解后的样品进行稀释后,再进行上样缓冲液处理;
3.
蛋白条带中间凹陷,两边突起:
●可能原因是样品盐离子浓度或表面活性剂浓度过高。建议稀释样品或对样品进行透析后,再进行上样缓冲液处理和上样。
1. 电泳缓冲液不建议重复使用,因为电泳之后缓冲液的离子强度、缓冲能力都会发生变化,不能确保电泳效果;
2. 电泳结束后,可以使用Tris-Glycine转膜液进行转膜。将凝胶浸泡在转膜液中10~15min, 使其充分平衡,再进行转膜;
3. 上样时,移液器吸头切勿过度插入点样孔,以免戳破凝胶造成漏液;
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
5. 本产品仅限科研使用。
Zhang, S., Xia, S., Chen, L., Chen, Y., & Zhou, J. (2023). Covalent Organic Framework Nanobowls as Activatable Nanosensitizers for Tumor‐Specific and Ferroptosis‐Augmented Sonodynamic Therapy. Advanced Science, 2206009.(IF 17.521)
Ji, L., Qian, W., Gui, L., Ji, Z., Yin, P., Lin, G. N., ... & Gao, W. Q. (2020). Blockade of β-Catenin–Induced CCL28 Suppresses Gastric Cancer Progression via Inhibition of Treg Cell Infiltration. Cancer Research, 80(10), 2004-2016.(IF 9.727)
Bi, T., Liang, P., Zhou, Y., Wang, H., Huang, R., Sun, Q., ... & Liu, Z. (2023). Rational design of bioorthogonally activatable PROTAC for tumor-targeted protein degradation. Journal of Medicinal Chemistry, 66(21), 14843-14852.(IF 7.3)
Li, Y., Ding, T., Hu, H., Zhao, T., Zhu, C., Ding, J., ... & Guo, Z. (2021). LncRNA-ATB participates in the regulation of calcium oxalate crystal-induced renal injury by sponging the miR-200 family. Molecular Medicine, 27(1), 1-15.(IF 6.376)
Yang, Y., Chen, Y., Liu, J., Zhang, B., Yang, L., Xue, J., ... & Bian, R. (2023). MiR-125b-5p/STAT3 Axis Regulates Drug Resistance in Osteosarcoma Cells by Acting on ABC Transporters. Stem Cells International, 2023.(IF 5.131)
Zhou, L., He, F., Xiang, X., Dong, C., Xiang, T., Li, X., ... & Ma, X. (2023). Radioactive and Fluorescent Dual Modality Cysteine Cathepsin B Activity-Based Probe for Cancer Theranostics. Molecular Pharmaceutics.(IF 4.9)